【Western Blottingの注意点＆Tips】第4回「Blockingと抗体反応」

先日Western Blottingのプロトコールに関する記事を書きました。

プロトコールの工程1つ1つに関して解説や注意点などを述べていきたいと思います。

…で、前回Blottingまで解説を行って、今回はBlockingからなんですが、これは実はすでにいくつか記事を書いています。

この点はなかなか大変で、苦労したので記事もいくつかある訳です。

上記の内容と重なる部分もありますが、ポイントだけ以下にまとめてみます。

役割：1次抗体の非特異的結合を減少させ、バックグラウンドシグナルを低減させる。

私が利用したのは以下の2種類

・Block ace (BSA)

・Skim Milk (10%)

室温60分がよくオススメされている時間。上記いずれもかなり優秀な印象。

最終的にはSkim Milkで実験はうまくいきました。

詳しくは以下のページで。

・抗体は同じ会社の製品でも品質に差があり、よくできているものが来ない可能性もあるので注意。

・抗体希釈液は適切なものを選ぶべき！

・バンドが薄い、濃いで反応時間を伸ばす、短縮するなどの工夫を。

詳しくは以下のページで。

今回は短いですが以上です。