・非誘導MxCre; Jak2fl / flマウスの骨髄をワイルドタイプマウスに移植し、移植後4週間ン後にpI:pCを注射すると…ドナー由来HSC割合は？→コントロールと比較し有意に減少。初代Jak2欠損動物と同レベル。＝Jak2欠損マウスにおけるHSC減少が自律的(環境依存的ではない)ということ！！

②Jak2欠損は成人HSCの長期的な生着と自己複製能力を損なう

・Jak2欠損マウスのHSCの機能はどうなる？(生着能や自己複製能はどうなる？)→ControlとJak2欠損マウス骨髄を致死量放射線照射後に移植(コンピテントセルなし)

　●Control…効率的に生着(1 × 105)

　●Jak2…20倍の数の細胞数を移植しても生着できず(2 × 106) 18n日以内に全て死亡。

・次にコンピテントセルを用いた移植により、造血能再構築時のHSC機能を分析。

・pI由来のBM細胞; pC誘導コントロールまたはJak2欠損マウス（CD45.2 +）をCD45.1 +競合BM細胞と1：1または10：1の比率で混合→致死量放射線照射後マウスへ。→コンピテントセルの10倍の細胞数移植してもJak2欠損マウスの骨髄移植では完全には競合できず。

・非誘導MxCre; Jak2fl / flマウスの骨髄を移植→コントロールと同等の生着率であることを確認したのちにpI; pCを注射しJak2を欠損させる。→Gr1陽性細胞やB220陽性細胞が注射後に少しずつ減少。→Jak2欠損はHSCの機能障害につながっている。

③Jak2はLSK細胞の静止期と生存維持に必要

・ほとんどのHSCは、HSCプールを守るために静止期(G0期)にいる。

・BrdUを用い、Jak2の細胞周期に与える影響を調査。→Jak2欠損LSKへのBrdU取り込み有意に遅い。コントロールと比較し、S期が多くG0,G1期の割合が少ない。→Jak2欠損はHSC静止期の喪失をもたらし、HSCの消耗につながる。

・アネキシンV染色…Jak2欠損LSKで有意なアポトーシス増加(～9倍)あり。

④Jak2欠損LSK細胞においては活性酸素とp38 MAPK活性化が増加する

・活性酸素喪失は静止期HSｃの喪失を促進する。またp38 MAPK活性化によってHSCの寿命を制限する。

・Jak2欠損LSK細胞では、活性酸素の増加、p38 MAPKリン酸化の有意な上昇(約3倍)が見られた。

・ ROS scavenger N‐acetyl l‐cysteine (NAC)によって活性酸素を減らすとHSC機能は改善する？→改善する！・Jak2欠損によって活性酸素増える→HSC機能障害につながっている！

⑤Jak2欠損LSK細胞におけるTPOとSCFシグナル伝達

・TPOとSCFはin vivoでのHSC維持に重要とされている。

・TPO＆SCFシグナル伝達にJak2欠損は何らかの影響を及ぼすか？

・TPOにより誘発されるStat5、Erk、Akt活性化は、Jak2欠損LSKで著しく減少した。

⑥Jak2欠損はHSC維持に関与する複数の経路を損なう

・LSK細胞の遺伝子発現プロファイリングを実施
→HSC特異的遺伝子の有意なダウンレギュレーションあり。

・Jak2の非存在下でダウンレギュレートされた遺伝子と、Jak / Statシグナル伝達経路を特定する遺伝子セット、およびTPO、MAPK、PI3キナーゼ、mTOR経路を含む他のさまざまなシグナル伝達経路との強い相関あり。・HSC静止期維持や自己複製能維持に必要な遺伝子がダウンレギュレートされていた。

今回は以上です。次回はDiscussionです。