ELISAに使用される試薬の解説 - こりんの基礎医学研究日記

本日も再びELISA関連です。

ELISAに関してこれまで書いた他の記事は以下の通りです。

＜追記＞

本日はELISAに使用するいくつかの代表的な試薬について説明します。

ビオチン

ビタミンB群の一種でビタミンB7とも呼ばれる。分子量が非常に小さい。次項で解説するアビジンと非常に高い親和性を示し、アビジン・ビオチン・システムと呼ばれ、ELISAの他、免疫組織化学染色やフローサイトメトリーなど様々な分野で応用されている。

アビジン

生卵白中に含まれるタンパク質。(調理によってビオチン親和性は失われる。ビオチンとの親和性は生卵の状態でのみ見られる。)

ELISAやウェスタンブロットに下記のアビジン・ビオチン・システムが利用されるときは、しばしばHRP と呼ばれる西洋わさび（Horseradish）が付加されています。HRPは、過酸化水素を基質とした酵素で、あとに出てくるTMBを反応させると青紫色の色素が生じ、ELISAではこれを吸光度計にて測定しています。

アビジン・ビオチン・システム

抗体を付加したプレートに、検出に使いたいサンプル(尿や血清)を入れた後、アビジン→ビオチン→TMB→Stop slutionを順に反応させて吸光度測定するという方法が、サンドイッチELISAではよく用いられます。

既述の通りビオチン・アビジンは親和性が高く、とても強固な結合なので、相互作用に強く安定なようです。また反応も素早く起きるため、その点も都合がよいようです。

＜なぜELISAにアビジン・ビオチン・システムが利用されるのか？＞

結論からいうとこれは立体障害を緩和するためです。通常、抗体に酵素を付加したい(それによって抗体を発色させ、目的のタンパク質を検出したい)わけですが、酵素は非常に分子量が大きいため、立体障害が生じてしまうことがあります。特に酵素は分子量がとても大きいため、抗原や抗体活性に影響を与えてしまう可能性があります。そうするとELISAで検出できる感度が低下してしまいます。これを防ぐ1つの方法とし、架橋試薬のリンカー長を延長をアビジン・ビオチン・システムによって試みています。